使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯mianyi試劑盒是基于雙抗體夾心技術原理，來檢測大鼠Wnt2B，只能用于研究用途，不得用于醫學診斷。
用 途：用于大鼠血清、血漿及相關液體樣本中Wnt2B測定。
工作原理
本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯mianyi吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠Wnt2B水平。向預先包被了大鼠Wnt2B單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠Wnt2B，溫育；溫育后，加入生物素標記的抗Wnt2B抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合，形成mianyi復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入底物A、B，產生藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠Wnt2B的濃度呈正相關。
試劑盒組成
| 試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
| 說明書 | 1份 | 1份 | |
| 封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
| 密封袋 | 1個 | 1個 | |
| 酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
| 標準品160ng/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品稀釋液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 鏈霉親和素-HRP | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 生物素標記的抗WNT2B抗體 | 0.5ml×1瓶 | 1 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 濃縮洗滌液 | （20ml×20倍）×1瓶 | （20ml×30倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
需要而未提供的試劑和器材
注意事項
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
操作程序
| 80ng/L | 5號標準品 | 120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液 |
| 40ng/L | 4號標準品 | 120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
| 20 ng/L | 3號標準品 | 120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
| 10ng/L | 2號標準品 | 120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
| 5 ng/L | 1號標準品 | 120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液 |
2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3.加樣：1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗WNT2B抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；3）代測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗WNT2B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
7.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。
操作程序總結：
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。
2.批內與批間應分別小于9%和15%
檢測范圍：
檢測范圍：2ng/L -90ng/L
保存條件及有效期：
保存：2-8℃。
有效期：6個月(2-8℃)。
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